ГДЗ по Биологии 10 класс учебник Пасечник В.В., Каменский А.А., Рубцов А.М. номер 3

3. Секвенирование ДНК — это определение последовательности нуклеотидов в молекуле ДНК. Два основных метода секвенирования ДНК были разработаны в конце 70-х гг. ХХ в Метод химической деградации по Максаму-Гилберту, в основе которого лежит расщепление химическим путём радиоактивно меченых фрагментов ДНК, был разработан в 1976 году. Мечению подвергается только один конец цепи фрагмента ДНК (3' или 5'). После этого в четырёх пробирках с использованием разных химических реагентов избирательно модифицируются либо только пуриновые нуклеотиды (в зависимости от условий, Г или Г+А), либо только приримидиновые нуклеотиды (в зависимости от условий, Ц или Ц+Т). После этого с помощью других химических реагентов проводится разрыв цепи ДНК по модифицированным нуклеотидам. Условия реакций авторы метода подбирали таким образом чтобы в итоге получить полный набор субфрагментов ДНК разной ддины Последующий электрофорез в полиакриламидном геле и авторадиография (получение изображения радиоактивно меченых полос на рентгеновской плёнке) позволяют восстановить полную структуру исследуемого фрагмента ДНК Ферментативный метод (метод обрыва цепи) был разработан Ф. Сэнгером (рис. 60) в 1977 году. Суть данного метода заключается в том, что к подготовленному для репликации фрагменту ДНК в среде с ДНК-поли меразой и дезоксинуклеотидами (среди которых есть радиоактивно меченые или флуоресцентно меченые) добавляются в определённом количестве 2', 3' дидезоксинуклеотиды, которые могут встраиваться в цепь ДНК, но не могут присоединять следующий нуклеотид, поэтому синтез ДНК в этом месте останавливается. Реакция проводится в четырёх разных пробирках, в каждую из которых добавляется только один из дидезоксинуклеотидов - дДДАТФ ддГТФ, ддТГФ или ддЦТФ. В итоге после проведения инкубации получается смесь фрагментов ДНК разной длины, которые в каждой из пробирок оканчиваются на одну и ту же букву (А, Г, Т, Ц). Эти фрагменты разделяются электрофорезом в полиакриламидном геле в четырёх разных дорожках проводится — авторадиография и — определяется — послеловательность нуклеотидов в данном фрагменте ДНК При использовании любого из этих методов необходимо расшифровывать последовательности перекрывающихся фрагментов молекулы ДНК, чтобы установить последовательность нуклеотидов всей молекулы